Unaprijeđeno praćenje DNK upozorava krivotvoritelje maslinovog ulja

Julie Butler
, suradnica Olive Oil Timesa | Izvještavanje iz Barcelone

Dr. Juan de Dios Alche i dr. Fendri Mahdi

Španjolski znanstvenici tvrde da su blizu ponude "testa očinstva" za djevičansko maslinovo ulje, što bi bio snažan saveznik u borbi protiv prijevara.

Njihov napredak u umijeću DNK otiska znači da im sada trebaju samo relativno mali uzorci – obično 100–200 ml – kako bi provjerili je li djevičansko maslinovo ulje doista onog sortimenta i podrijetla koji se navode.

Za razliku od kemijskih i senzornih testova – čiji rezultati u najboljem slučaju mogu snažno ukazati na to da je ulje pomiješano s nekim drugim biljnim uljem – otkrivanje DNK, recimo, lješnjakovog ili suncokretovog ulja u maslinovom ulju nedvosmislen je dokaz njegove prisutnosti, kažu oni.

Dr. Juan de Dios Alché, glavni istraživač na projektu Španjolskog nacionalnog istraživačkog vijeća (CSIC), rekao je za Olive Oil Times da još uvijek ima puno posla, ali se nada da će test za šest mjeseci biti komercijalno dostupan.

"Već smo imali priličan broj kontakata od ljudi iz prehrambenog sektora, uključujući i iz Sjedinjenih Država, i vjerujemo da postoji velika potražnja za njim", rekao je.

Alché, s Odsjeka za biokemiju, staničnu i molekularnu biologiju biljaka CSIC-a, koji je dio instituta Estación Experimental del Zaidín u Granadi, također je objasnio da bi on značajno dopunio, ali ne bi zamijenio, druge testove provjere.

Olive Oil Times: Koje su prednosti ovog testa?

Dr. Juan de Dios Alché: Djevičansko maslinovo ulje relativno je skupo i ljudi su spremni platiti više za kvalitete koje cijene, poput ulja iz određene regije ili sorte, što nepošteni proizvođači iskorištavaju. Ovim testom možemo provjeriti autentičnost maslinovog ulja, potvrđujući je li ono doista podrijetla i sorte, odnosno sorti, navedenih na etiketi.

P: Koja su njegova ograničenja?

O: Ovo nije test koji će odrediti kvalitetu maslinovog ulja.Također, zahtijeva detekciju neoštećenog DNK-a, što se često teško pronađe u rafiniranom ulju. To je jedan od razloga zašto je osmišljen za upotrebu na djevičanskom maslinovom ulju i treba se smatrati dopunom drugim testovima, a ne zamjenom.

Također, u nekim slučajevima ne možemo pozitivno analizirati uzorke jer sadrže vrlo, vrlo male količine DNK ili jer je DNK degradirana. U takvim slučajevima moramo koristiti veće uzorke, ponekad i do 1 litre. Korištenje visokih temperatura tijekom mljevenja jedan je od načina na koje DNK biva degradirana.

P: Kako ste došli na ideju za razvoj testa?

O: Kao dio našeg istraživanja peludi razvili smo veliku bazu podataka DNK fragmenata uzetih iz listova više od 90 različitih sorti maslina, uglavnom iz Španjolske, Portugala i Tunisa, ali i s najčešćih sorti iz Italije, Grčke, Francuske, Maroka i Libanona.

Jedna od njegovih primjena je certificiranje sorte masline iz cjepiva protiv alergije na pelud masline, ali smo isprobali i otkrili da ga možemo koristiti i za identifikaciju maslinovog ulja, iako se u Španjolskoj cijeli plod masline, uključujući košticu, melje za proizvodnju ulja i ne znamo točno odakle potječe DNK koji u njemu nalazimo.

P: Vaša baza podataka temelji se na DNK iz listova masline, no znanstvenici su izvijestili da DNK iz listova masline nije odgovarala DNK iz ulja te masline.

O: Utvrdili smo da se u velikoj većini slučajeva podudaraju.

P: Kako test funkcionira?

O: Temelji se na upotrebi mikrosatelita (poznatih i kao SSR – Simple Sequence Repeats) kao molekularnih markera. Izlučujemo DNK i koristimo ono što je poznato kao lančana reakcija polimerazom (PCR) za amplifikaciju tih SSR sekvenci. Zatim provjeravamo njihovu veličinu sekvenciranjem i uspoređivanjem s veličinama koje su već u našoj bazi podataka.

Čini se da drugi molekularni markeri sada pružaju otiskivanje prstiju s još višom razlučivošću od SSR-ova, ali mi i dalje koristimo mikrosatelite jer već postoje mnoge baze podataka temeljene na njima, poput naše, jednostavni su za tumačenje i reprodukciju te imaju visoku diskriminacijsku moć.

P: Je li test dugotrajan i je li priprema uzorka komplicirana?

O: Trenutno je potrebno 7–10 dana, uključujući analizu. DNK ekstrahiramo pomoću centrifuge, otapala i komercijalnih setova koje smo prilagodili te za test koristimo specijaliziranu laboratorijsku opremu, osobito PCR termocikler i kapilarnu sekvencirnu aparaturu. Potrebna predobrada uzorka nije toliko komplicirana, relativno govoreći.

P: Kakav ste napredak postigli u posljednje dvije godine?

Osim proširenja baze podataka, optimizirali smo proces ekstrakcije DNK iz uzoraka nafte. Koristimo različite metode za ekstrakciju DNK, od kojih su neke komercijalno dostupne, ali prilagođene od strane nas, a također smo optimizirali i proces amplifikacije.

P. Bi li ovaj test bio dovoljno isplativ za široku primjenu?

O. Cijena još nije utvrđena jer ne koristimo našu metodu u komercijalne svrhe. No, utvrdili smo da postoji potražnja za njom iz prehrambenog sektora i moguće je da ćemo je za otprilike šest mjeseci moći ponuditi kao uslugu te da, da, bit će pristupačna. Mali uzorak može potvrditi veliku seriju ulja.

P: Na čemu trenutno radite?

Test traje dugo pa pokušavamo to skratiti. Također planiramo testirati veći broj uzoraka maslinovog ulja.

Nadalje, iako smo uspjeli otkriti DNK iz ulja lješnjaka i suncokreta u maslinovom ulju, zasad možemo samo potvrditi prisutnost miješanih ulja, ali ne možemo kvantificirati njihov udio, pa je to nešto na čemu također radimo.

---

Dodatna literatura o molekularnim markerima i provjeri autentičnosti maslinovog ulja:

– Tragivost maslinovog ulja, maslinov genski fond – uzgoj masline, industrija stolnih maslina i maslinovog ulja u Italiji, dr. Innocenzo Muzzalupo (ur.)

– Pregled autentičnosti masline i maslinovog ulja

– Living in the 70's – Detecting adulteration by seed oils, Richard Gawel

Izvori:

Tehnika razvijena za otkrivanje potencijalne prijevare s maslinovim uljem. (Priopćenje za javnost na španjolskom jeziku Eksperimentalne postaje Zaidín Španjolskog nacionalnog istraživačkog vijeća.)
Borba protiv prijevara s hranom znanošću, Chemistry World
Identifikacija masline postaje brza i jednostavna, Olive Oil Times