Melhoria no rastreamento de DNA coloca os falsificadores de azeite de oliva na mira

Por Julie Butler
, colaboradora do Olive Oil Times | Reportagem de Barcelona

Dr. Juan de Dios Alche e Dr. Fendri Mahdi

Cientistas espanhóis afirmam estar prestes a oferecer “testes de paternidade” para o azeite virgem, o que seria um poderoso aliado contra a fraude.

Seus avanços na técnica de impressão digital de DNA significam que agora precisam apenas de amostras relativamente pequenas — normalmente 100-200 ml — para verificar se o azeite de oliva virgem é realmente da variedade e origem declaradas.

E, ao contrário dos testes químicos e sensoriais — cujos resultados podem, no máximo, indicar fortemente que o azeite foi adulterado com outro óleo vegetal —, encontrar o DNA de, digamos, óleo de avelã ou de girassol no azeite de oliva é prova inequívoca de sua presença, afirmam eles.

O Dr. Juan de Dios Alché, pesquisador-chefe do projeto do Conselho Superior de Pesquisa Científica (CSIC) da Espanha, disse ao Olive Oil Times que ainda há muito trabalho a ser feito, mas espera que, dentro de seis meses, o teste esteja disponível comercialmente.

“Já recebemos vários contatos de pessoas do setor alimentício, inclusive nos Estados Unidos, e acreditamos que há muita demanda por ele”, disse ele.

Alché, do departamento de Bioquímica, Biologia Celular e Molecular das Plantas do CSIC, que faz parte do instituto Estación Experimental del Zaidín, em Granada, também explicou que o teste complementaria substancialmente, mas não substituiria, outros testes de verificação.

Olive Oil Times: Quais são as vantagens desse teste?

Dr. Juan de Dios Alché: O azeite virgem é relativamente caro e as pessoas estão dispostas a pagar mais por qualidades que valorizam, como azeite de uma determinada região ou variedade, algo de que os produtores desonestos se aproveitam.Com este teste, podemos verificar a autenticidade de um azeite, confirmando se ele realmente é da origem e da variedade, ou variedades, indicadas no rótulo.

P: Quais são as suas limitações?

R: Este não é um teste que determinará o grau de um azeite.Além disso, ele requer a detecção de DNA intacto, o que muitas vezes é difícil de encontrar em azeite refinado. Essa é uma das razões pelas quais ele foi projetado para ser usado em azeite virgem e deve ser visto como um complemento a outros testes, não como um substituto.

Além disso, em alguns casos, não conseguimos analisar as amostras com precisão porque elas contêm quantidades muito, muito pequenas de DNA ou porque o DNA está degradado. Nesses casos, precisamos usar amostras maiores, às vezes de até 1 litro. O uso de altas temperaturas durante a moagem é uma das formas pelas quais o DNA se degrada.

P: Como vocês chegaram a desenvolver o teste?

R: Como parte de nossa pesquisa sobre pólen, desenvolvemos um grande banco de dados de fragmentos de DNA extraídos das folhas de mais de 90 variedades diferentes de oliveira, principalmente da Espanha, Portugal e Tunísia, mas também incluindo as variedades mais comuns da Itália, Grécia, França, Marrocos e Líbano.

Uma de suas utilidades é certificar a variedade de azeitona em vacinas contra a alergia ao pólen de azeitona, mas tentamos e descobrimos que também poderíamos usá-la para identificar o azeite de oliva, embora na Espanha o fruto inteiro da azeitona, incluindo a semente, seja triturado para produzir azeite e não saibamos exatamente de onde vem o DNA que encontramos nele.

P:‭ ‬Sua base de dados se baseia no DNA de folhas de oliveira, mas cientistas relataram ter encontrado que o DNA das folhas de uma oliveira não correspondia ao do azeite da árvore.

R. Descobrimos que, na grande maioria dos casos, eles coincidem.

P. Como funciona o teste?

R: Ele se baseia no uso de microssatélites (também conhecidos como SSRs — Simple Sequence Repeats) como marcadores moleculares.‭ ‬Extrai-se‭ ‬o DNA‭ ‬e utiliza-se o que‭’‬s conhecido como reação em cadeia da polimerase‭ (‬PCR‭) ‬para amplificar‭ ‬essas sequências de SSR. Em seguida,‭ ‬verifica-se o seu tamanho por meio de sequenciamento e compara-se com os dados já existentes em nosso banco de dados.

Outros marcadores moleculares parecem agora oferecer uma resolução de impressão digital ainda maior do que os SSRs, mas continuamos a usar microssatélites porque já existem muitas bases de dados baseadas neles, como a nossa, são fáceis de interpretar e reproduzir e têm um elevado poder discriminatório.

P: O teste demora muito e o pré-tratamento da amostra é complicado?

R: Atualmente, leva de 7 a 10 dias, incluindo a análise. Extraímos o DNA usando uma centrífuga, solventes e kits comerciais que personalizamos, e utilizamos equipamentos laboratoriais especializados para o teste, especialmente um termociclador de PCR e um sequenciador capilar. O pré-tratamento necessário da amostra não é tão complicado, relativamente falando.

P: Que progressos vocês fizeram nos últimos dois anos?

Além de expandir o banco de dados, otimizamos o processo de extração de DNA de amostras de petróleo. Utilizamos vários métodos para extrair o DNA, alguns deles disponíveis comercialmente, mas personalizados por nós, e também otimizamos o processo de amplificação.

P.‭ ‬Esse teste seria economicamente viável o suficiente para ser amplamente utilizado‭?

R. O preço ainda não foi determinado porque não estamos fazendo nenhum uso comercial do nosso método. Mas descobrimos que há demanda por ele no setor alimentício e é possível que, em cerca de seis meses, possamos oferecê-lo como um serviço e, sim, ele seria acessível.‭ ‬Uma pequena amostra pode verificar um grande lote de óleo.

P: No que vocês estão trabalhando agora?

O teste leva muito tempo, então estamos tentando reduzir isso. Também planejamos testar uma gama mais ampla de azeites.

Além disso, embora tenhamos conseguido detectar DNA de óleos de avelã e girassol no azeite, até agora só podemos confirmar a presença de óleos estranhos, não podemos quantificar a proporção, então isso é algo em que também estamos trabalhando.

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Leitura adicional sobre marcadores moleculares e verificação da autenticidade do azeite:

– Rastreabilidade do Azeite, Germoplasma da Oliveira – O Cultivo da Oliveira, a Indústria da Azeitona de Mesa e do Azeite na Itália, Dr. Innocenzo Muzzalupo (Ed.)

– Uma visão geral da autenticação da oliveira e do azeite

– Vivendo nos anos 70 – Detecção de adulteração por óleos de sementes, Richard Gawel

Fontes:

Técnica desenvolvida para detectar possíveis fraudes no azeite. (Comunicado de imprensa em espanhol da Estação Experimental Zaidín do Conselho Nacional de Pesquisa da Espanha.)
Combate à fraude alimentar com a ciência, Chemistry World
Identificação de azeitonas fica rápida e fácil, Olive Oil Times